11个SNP位点与T2D的相关性研究 1研究内容和技术路线

1.1研究内容与糖尿病早期无创检测诊断方法

1.1.1筛选2型糖尿病患者及正常对照受试者

[1]  依据2006年公布的WHO糖尿病诊断标准筛选2型糖尿病患者和 正常对照组受试者。

[2]  对受试者进行体格检查及临床生化指标检测。

[1]   SNP位点的筛选

[12]               选择在中国人群中已经识别与T2D发病有关的易感基因SNP位 点。

[13]              查询国外生物公司已用于糖尿病早期筛查的易感基因SNP位 点。

1.1.3基因组DNA的提取与检测

12         采用全血基因组提取试剂盒对2型糖尿病患者和正常对照组受试 者的血液进行DNA的提取。

13         依据A260 /A280的比值估计提取基因组的浓度。

1.1.4引物设计与测序

1.2.  米用软件Primer Premier5.0和Oligo 6.0进行易感基因SNP位点

的引物设计。

1.3.  使用测序仪对易感基因SNP位点测序并分析基因型。

1.1.5统计分析测序结果

(1)  对计量资料采用单因素方差分析(ANOVA)进行正态性检验和方差 齐性检验。

(2)  对测序结果用Hardy-Weinberg平衡原理估测样本的群体代表 性，计算组内基因型频率、等位基因型频率、劣势及优势基因型的差异， 计算卡方值、优势比及其可信区间。

籲纯水系统（美国马萨诸塞州比尔里卡市，Millipore)

籲立式压力蒸汽灭菌器（上海，申安）

籲干燥箱（上海，精宏）

鲁BD采血空针（上海碧迪公司）

鲁BD真空采血管（EDTA抗凝，上海碧迪医疗器械有限公司）

籲加样枪（Eppendorf,Gilson)

2. 1.2主要试剂

籲DNA提取试剂：北京百泰克DNA全血基因组提取试剂盒（离心柱 型）

鲁琼脂糖（上海，申能博彩）

籲溴化乙锭（上海，申能博彩）

[3]  DNA Maker (DL2000，美季）

鲁引物（上海，美季）

籲测序仪所用缓冲液（ABI 3730xl，美国应用生物系统公司）

鲁PCR试剂：大连，宝生物有限公司 TaqDNA 聚合酶（5U/pl) dNTP混合物（各2.5mM)

10 X PCR Buffer (Mg²⁺Plus) ddH2O

[4]  50 x Tris-醋酸（TAE)

Tris

[2]   5 M EDTA (pH 8.0)

冰醋酸

加蒸馏水定容，至1L，使用时稀释50倍。

籲BigDye测序反应试剂盒主要试剂是BigDyeMix，内含PE专利四 色突光标记的 ddNTP 和普通 dNTP，AmpliTaq DNA polymerase

FS，反应缓冲液等。

籲70%乙醇和无水乙醇（杭州，长征）

籲3mol/L醋酸钠（pH5.2):称取40.8g醋酸钠溶于70ml蒸馏水中， 冰醋酸调pH至5.2，定容至100ml，高压灭菌后分装。

_模板抑制试剂（TSR) (ABI)

籲10x电泳缓冲液（ABI)

242 g 100 ml 57.1 ml

成都华西华科研究所研发生产多种糖尿病及并发症早期无创检测诊断系统

研发生产无创糖尿病及并发症早期检测诊断仪

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